Isi
Biokimia mempelajari molekul seperti DNA, RNA, dan protein. Teknik blotting adalah apa yang para ilmuwan gunakan untuk memisahkan jenis-jenis molekul ini. Dalam sel, mereka ada sebagai campuran. Blotting memungkinkan para peneliti untuk menemukan satu protein di antara banyak protein, seperti jarum di tumpukan jerami. Blotting umumnya dilakukan dengan membiarkan campuran DNA, RNA atau protein mengalir melalui lempengan gel. Gel ini memungkinkan molekul kecil bergerak lebih cepat daripada yang lebih besar. Molekul yang dipisahkan kemudian ditekan pada membran, yang membantu memindahkan molekul dari gel ke membran. Molekul menempel pada membran, tetapi tetap di lokasi yang sama, terpisah satu sama lain, seolah-olah mereka masih di dalam gel.
Western Blot
Western blotting adalah teknik umum untuk memisahkan protein berdasarkan ukuran, tetapi dalam kolom lurus. Kolom paralel ini memungkinkan para peneliti untuk membandingkan jumlah protein di sampel yang berbeda yang berjalan bersebelahan, seperti jalur bowling. Misalnya, jika Anda menguji efek jumlah obat yang berbeda terhadap pertumbuhan sel, Anda akan memperlakukan empat kelompok sel yang berbeda dengan jumlah obat yang berbeda. Kemudian Anda bisa memecah sel-sel terbuka dan menjalankan protein masing-masing kelompok dalam jalur terpisah pada gel. Menyebarkan protein dengan cara ini memungkinkan Anda untuk melihat apa yang terjadi dengan peningkatan konsentrasi obat pada protein tertentu.
Blot Utara
Northern blotting digunakan untuk mendeteksi RNA. Sel dapat dipecah terbuka untuk melepaskan RNA mereka. RNA dari berbagai jenis sel dapat dijalankan pada jalur terpisah pada gel. Gel menyebarkan RNA yang berbeda berdasarkan ukuran. Baris paralel dan rapi dari RNA ini memungkinkan seorang peneliti untuk membandingkan tipe sel mana yang memiliki berapa banyak RNA yang mana. Metode ini memungkinkan seorang peneliti untuk menentukan apakah sel-sel dari penyakit tertentu memiliki lebih banyak RNA ini atau kurang dari RNA itu. Northern blotting dapat mengungkapkan bagaimana suatu penyakit bekerja pada tingkat produksi RNA.
Southern Blot
Southern blotting adalah teknik blotting asli, yang memulai sistem penamaan. Itu ditemukan oleh Edwin Southern. Southern blot digunakan untuk mendeteksi jumlah DNA dalam suatu campuran. Seperti halnya protein dan RNA, DNA suatu sel dapat dilepaskan ketika sel itu rusak. Southern blotting memisahkan DNA dari berbagai jenis sel berdasarkan ukuran. DNA dari setiap sampel tersebar ke jalur paralel yang rapi. Masing-masing potongan DNA dapat dideteksi menggunakan probe radioaktif atau fluoresen, yang dirancang untuk mengikat hanya pada potongan DNA itu. Sinyal energi dari penyelidikan radioaktif, atau kilatan cahaya dari sinyal fluoresens, memberi tahu para peneliti berapa banyak potongan DNA itu di setiap sampel.
Bercak lainnya
Tiga teknik blotting utama - Barat, Utara dan Selatan - telah dimodifikasi dengan berbagai cara untuk mendeteksi molekul yang sedikit berbeda. Western Blot vs Southern blot, misalnya. masing-masing mendeteksi protein dan DNA. Setiap teknik yang dimodifikasi umumnya dilakukan dengan cara biasa, tetapi menggunakan metode yang berbeda untuk mendeteksi molekul yang sedang menyebar ke jalur paralel. Bintik barat daya mendeteksi molekul protein yang menempel pada DNA. Bintik barat laut mendeteksi molekul protein yang menempel pada RNA. Farwestern blots mendeteksi molekul protein yang menempel pada protein lain.