Isi
Hitung sampel RNA Anda dengan mengukur absorbansi sinar ultraviolet (UV). Spektrofotometer nano-drop hanya akan menggunakan satu atau dua mikroliter sampel Anda, yang dapat Anda pulihkan. Spektrofotometer lainnya membutuhkan sampel yang jauh lebih besar. Koefisien kepunahan untuk nukleotida pada panjang gelombang UV 260nm dalam jalur cahaya 1-cm adalah 20. Berdasarkan pada koefisien kepunahan ini, absorbansi RNA 40 μg / ml dalam kondisi yang sama adalah satu. Dengan menggunakan informasi ini, Anda dapat menghitung konsentrasi sampel RNA Anda.
Jika perlu, buat pengenceran sampel Anda. Pengenceran standar untuk mikrokuvet adalah 1:40. Buat pengenceran ini dengan menambahkan sampel RNA 2μL ke dalam air steril 78μL.
Ikuti protokol spektrofotometer khusus Anda untuk mengkalibrasi mesin dengan menggunakan blanko dan kemudian tentukan kepadatan optik sampel Anda pada panjang gelombang UV 260nm.
Lipat gandakan absorbansi sampel Anda dengan faktor pengenceran Anda dengan 40μg RNA / mL. Persamaannya adalah: "Konsentrasi RNA (μg / ml) = (OD260) x (faktor pengenceran) x (RNA 40μg / ml) / (1 unit OD260)" (Hofstra.edu) Misalnya: Jika Anda mencairkan sampel dengan 1:40 dan angka absorbansi Anda adalah 0,08, Anda akan mengalikan 0,08 x 40 x 40 = 128 μg / ml = 0,13 µg / μL
Cari tahu kemurnian sampel Anda dengan mengambil bacaan absorbansi lain pada panjang gelombang UV 280nm. Rasio OD 260 / OD 280 akan menunjukkan apakah - dan pada tingkat apa - sampel Anda terkontaminasi dengan protein atau fenol. Hasil 1,8 hingga 2,0 menunjukkan kualitas RNA.