Isi
- Keuntungan: Sensitivitas
- Keuntungan: Kekhususan
- Kerugian: Cenderung Hasil Salah atau Subjektif
- Kerugian: Biaya Tinggi dan Permintaan Teknis
Western blot, teknik analitik yang digunakan untuk menentukan protein tertentu dalam sampel yang diberikan, menggunakan kemampuan enzim atau antibodi primer berlabel fluoresensi untuk berikatan dengan antigen spesifiknya. Ini adalah proses tiga langkah yang dimulai dengan elektroforesis gel, diikuti oleh blotting membran dan pemeriksaan dengan antibodi. Deteksi protein dapat langsung atau tidak langsung, dengan yang terakhir menggunakan antibodi sekunder berlabel diarahkan terhadap primer. Meskipun diterima sebagai teknik analisis protein rutin, western blot memiliki keterbatasan serta manfaatnya.
Keuntungan: Sensitivitas
Salah satu argumen terbesar yang mendukung western blot adalah sensitivitasnya. Karena kemampuannya mendeteksi sesedikit 0,1 nanogram protein dalam sampel, teknik ini secara teoritis dapat berfungsi sebagai alat diagnostik awal yang efektif, merasakan bahkan respons imunogenik sekecil apa pun dari virus atau bakteri dalam sampel pasien. Western blot tidak langsung semakin membangun sensitivitas ini dari kemampuan antibodi sekunder untuk memperkuat intensitas sinyal yang terdeteksi oleh sistem pencitraan. Sensitivitas yang lebih besar berarti bahwa lebih sedikit antibodi diperlukan untuk pengujian, yang mengurangi biaya laboratorium secara signifikan.
Keuntungan: Kekhususan
Teknik western blot berutang kekhususannya pada dua faktor yang berkontribusi besar. Pertama, elektroforesis gel memilah sampel menjadi protein dengan ukuran, muatan, dan konformasi yang berbeda. Proses ini sendiri merupakan langkah besar menuju deteksi, karena pita yang terbentuk dalam gel sudah memberikan petunjuk tentang ukuran protein atau polipeptida yang menarik. Spesifisitas interaksi antibodi-antigen berfungsi sebagai faktor besar kedua. Karena antibodi spesifik menunjukkan afinitas untuk protein tertentu, proses tersebut dapat secara selektif mendeteksi protein target bahkan dalam campuran 300.000 protein berbeda.
Kerugian: Cenderung Hasil Salah atau Subjektif
Terlepas dari sensitivitas dan spesifisitasnya, noda barat masih dapat menghasilkan hasil yang salah. Hasil positif palsu ketika antibodi bereaksi dengan protein yang tidak dimaksudkan, yang sering terjadi ketika seorang pasien yang dites HIV memiliki TB atau sejumlah infeksi parasit. Palsu-negatif, di sisi lain, dapat dengan mudah terjadi jika protein yang lebih besar tidak diberikan waktu yang cukup untuk mentransfer dengan benar ke membran. Blotting dan pemrosesan yang tidak tepat sering menghasilkan pita miring, pudar, atau bahkan berganda, sehingga hasil pengujian tunduk pada interpretasi teknisi.
Kerugian: Biaya Tinggi dan Permintaan Teknis
Biaya western blot adalah gabungan dari pengeluaran individu besar untuk antibodi yang ditandai, analis yang terampil, dan peralatan laboratorium. Proses yang rumit, western blotting membutuhkan ketelitian di setiap langkah untuk identifikasi yang tepat dari konstituen sampel. Kesalahan kecil dalam konsentrasi reagen atau dalam periode inkubasi dapat menjadi bencana bagi seluruh proses. Akhirnya, peralatan yang diperlukan untuk deteksi dan pencitraan - chemiluminescent, fluorescent, radioactive, atau sistem deteksi laser - bisa terlalu mahal untuk unit mikrobiologi rata-rata.