Isi
Kromatografi cair kinerja tinggi adalah teknik untuk analisis campuran laboratorium. Ini adalah jenis kromatografi efisien yang menggunakan tekanan tinggi, bukan hanya gravitasi, untuk mendorong sampel campuran melalui kolom. Sampel disuntikkan, kemudian pompa yang mengandung tekanan tinggi membantu memindahkan sampel di sepanjang kolom yang padat, di mana ia dipisahkan menjadi komponen-komponen tersendiri. Pemisahan ini kemudian dianalisis oleh detektor untuk menghasilkan hasil.
Situs Injeksi
Untuk disuntikkan ke dalam HPLC, sampel pertama-tama harus dilarutkan dalam pelarut cair polar, lebih disukai yang dengan spektrum HPLC yang dikenal sehingga datanya dapat dibedakan dari sampel. Larutan cair yang mengandung sampel ditempatkan di instrumen dan dikirim ke kolom. Lokasi sebenarnya dari lokasi injeksi tergantung pada merek instrumen. Dalam kebanyakan kasus, proses injeksi dilakukan secara otomatis, tetapi dalam beberapa kasus pekerja laboratorium harus menyuntikkan sampel menggunakan jarum suntik kecil.
Komponen pompa
Komponen pompa unit HPLC diperlukan karena memberikan tekanan yang mendorong sampel melalui kolom. Kekuatan pompa bervariasi, tetapi yang kuat dapat menghasilkan tekanan hingga 6.000 psi, atau pound per inci persegi, yang diterapkan setelah sampel disuntikkan. Ini memungkinkan sampel untuk melewati kolom lebih cepat dan efisien daripada jika hanya meneteskan dengan menggunakan gaya gravitasi saja.
Deskripsi Kolom
Peningkatan kecepatan sampel yang melewati kolom dengan pompa memungkinkan untuk menggunakan jenis kolom yang berbeda dari yang digunakan dalam kromatografi cair sederhana. Bahan kemasan dalam kolom dapat memiliki ukuran partikel yang jauh lebih kecil, yang meningkatkan luas permukaan dan karenanya membantu interaksi sampel dengan kolom. Sebagian besar kolom HPLC bekerja melalui polaritas. Sampel dilarutkan dalam pelarut polar, dan kolom tersebut sebagian besar terdiri dari hidrokarbon non-polar. Bagian kutub dari molekul sampel melewati kolom dengan sangat cepat karena mereka terutama berinteraksi dengan pelarut, sedangkan sampel komponen non-polar berlama-lama di dalam kolom, membentuk interaksi yang lemah dengan komponen kolom. Oleh karena itu, komponen sampel berasal dari kolom dalam urutan dari sebagian besar polar ke non-polar.
Fungsi Detektor
Detektor juga bervariasi berdasarkan jenis instrumen HPLC yang digunakan. Namun, sebagian besar berfungsi dengan cara dasar yang sama. Sumber cahaya ultraviolet bersinar pada komponen sampel yang terpisah saat mereka keluar dari kolom. Sebagian besar senyawa organik menyerap sejumlah cahaya, sehingga ketika melewati sinar yang diberikan, detektor dapat mengetahui seberapa banyak cahaya yang diserap. Detektor juga mencatat waktu retensi komponen berdasarkan urutan keluarnya kolom. Output ini kemudian dapat dianalisis berdasarkan area puncak untuk menentukan sifat yang tepat dari komponen sampel.