Seperti halnya ketika menggunakan instrumen ilmiah apa pun, Anda perlu memastikan instrumen tersebut berfungsi dengan baik sebelum menggunakannya untuk menganalisis sampel. Memeriksa respons instrumen untuk sampel yang diketahui memverifikasi bahwa instrumen tersebut dikalibrasi dengan benar. Spektrofotometer membutuhkan kalibrasi berkala untuk memastikan respons instrumen yang benar. Spektrofotometer inframerah (IR) menggunakan polystyrene sebagai standar kalibrasi. Pemindaian instrumen dengan sepotong polystyrene pada pemegang sampel akan memverifikasi keberadaan puncak yang terlihat pada spektrum IR dan intensitas relatif dari puncak tersebut.
Nyalakan spektrofotometer dan biarkan memanas setidaknya selama 10 menit. Waktu pemanasan diperlukan agar sumber stabil. Tanpa sumber yang stabil, Anda tidak dapat mengandalkan spektrum yang diperoleh. Sinyal analitik bergantung pada redaman radiasi sumber oleh sampel.
Jalankan standar kalibrasi dengan menempatkan selembar film polystyrene di tempat sampel. Tanpa uji coba menggunakan sampel spektra yang dikenal yang disebut standar, Anda tidak memiliki kepastian bahwa spektrofotometer berfungsi dengan benar.
Ambil spektrum untuk sampel polystyrene. Bandingkan spektra dengan yang ada di referensi standar spektrum IR. Pastikan semua puncak yang diharapkan ada pada spektrum uji. Lokasi puncak harus sejajar dengan panjang gelombang penyerapan.
Periksa spektrum untuk memastikan bahwa kekuatan sinyal berada dalam 95 persen dari maksimum untuk puncak terkuat. Jika puncak terkuat dalam spektrum lebih atau kurang dari skala penuh, sesuaikan redaman untuk memberikan kekuatan sinyal yang benar.
Kalibrasi spektrofotometer IR sesering mungkin. Frekuensi kalibrasi minimum harus mencakup pemindaian tepat sebelum dan satu tepat setelah pekerjaan Anda hari itu.