Isi
- Sampel encer, Pelapisan dan Inkubasi
- Penghitungan Manual
- Penghitungan Otomatis
- Membuat Menghitung Lebih Rumit
Salah satu cara klasik untuk menentukan konsentrasi mikroba dalam sampel adalah dengan mencairkan sampel, menumbuhkan mikroba di piring dan menghitung koloni. Mikroba berlapis tumbuh dari unit pembentuk koloni yang terdiri dari satu atau lebih sel menjadi koloni yang terlihat yang dapat dilihat dan dihitung. Bakteri adalah mikroba yang paling umum untuk dinilai menggunakan jumlah lempeng. Hitungan koloni digunakan untuk mendeteksi dan menghitung mikroba di tanah, air dan makanan. Protokol untuk menghitung koloni menekankan pendekatan yang akurat dan metodis.
Sampel encer, Pelapisan dan Inkubasi
Jika Anda cukup mengoleskan sampel mikroba pada piring agar-agar, Anda akan melihat begitu banyak unit pembentuk koloni sehingga masing-masing koloni akan berbaur bersama, sehingga tidak mungkin untuk dihitung. Untuk mengatasi masalah ini, campurkan sampel ke dalam media cair, ambil sedikit campuran itu dan encerkan lebih lanjut. Ulangi proses ini enam hingga 10 kali. Sebarkan pengenceran terakhir pada piring agar-agar dan inkubasi selama empat hingga tujuh hari sebelum Anda menghitung koloni.
Penghitungan Manual
Trik utama dalam menghitung koloni adalah menghitung setiap titik koloni satu kali. Salah satu pendekatan adalah mengatur cawan Petri pada latar belakang kisi dan menghitung koloni di setiap sel kisi, bergerak dalam pola metodis melalui semua sel. Menandai koloni yang dihitung di belakang cawan Petri juga bisa menjadi pendekatan yang bermanfaat. Secara umum, Anda perlu menghitung setidaknya tiga piring; hanya menggunakan pelat yang berisi 30 hingga 300 koloni untuk membuat kesimpulan yang kuat, saran Jaringan Mikrobiologi, sebuah perusahaan yang menyediakan layanan konsultasi untuk laboratorium dan produsen. Pelat dengan koloni yang terlalu banyak untuk dihitung atau dengan terlalu sedikit koloni perlu dilapisi kembali dari pengenceran baru.
Penghitungan Otomatis
Kesalahan manusia menambah waktu yang terlibat dalam penghitungan koloni secara manual. Untuk meningkatkan akurasi dan efisiensi, tempatkan cawan Petri dalam perangkat penghitungan koloni otomatis. Penghitung koloni otomatis mengambil gambar piring, memisahkan koloni dari latar belakang dan kemudian menggunakan algoritma untuk menghitung koloni di piring. Algoritme dapat mengalami kesulitan membedakan koloni ketika dua atau lebih koloni bersinggungan, jadi ini adalah area pengembangan perangkat lunak yang sedang berlangsung.
Membuat Menghitung Lebih Rumit
Keakuratan menghitung kepadatan mikroba dari jumlah koloni memang memiliki beberapa keterbatasan. Unit pembentuk koloni dapat berupa sel tunggal, rantai sel atau seluruh rumpun sel. Asumsinya adalah bahwa suatu koloni mewakili satu sel, sehingga konsentrasi yang dihitung dari jumlah koloni bisa rendah. Mikroba yang berbeda membutuhkan kondisi pertumbuhan yang berbeda, dan koloni di atas lempeng hanya mewakili mikroba yang tumbuh di media pertumbuhan itu dalam kondisi inkubasi tersebut. Selain itu, penghitungan koloni tidak mendaftarkan sel mati, pertimbangan penting ketika Anda membutuhkan konsentrasi sel dalam sampel asli.