Isi
Para ilmuwan menggunakan pengenceran serial (serangkaian pengenceran 1:10) untuk menghitung kepadatan populasi kultur bakteri. Ketika setetes kultur yang mengandung sejumlah kecil bakteri disepuh dan diinkubasi, setiap sel secara teoritis akan cukup jauh dari sel-sel lain sehingga akan membentuk koloninya sendiri. (Pada kenyataannya, beberapa koloni mungkin merupakan keturunan dari dua sel di dekatnya, tetapi ini jarang terjadi pada kultur encer, sehingga jumlah koloni adalah perkiraan yang sangat baik dari jumlah sel yang semula ditransfer ke piring.) Karena kepadatan populasi adalah tidak diketahui, berbagai pengenceran harus digunakan untuk berakhir dengan satu piring dengan jumlah koloni yang sesuai.
Pengenceran Serial
Beri label enam tabung reaksi (masing-masing berisi 9 mL media pertumbuhan) sebagai 1 sampai 6. Labeli enam agar agar 1 sampai 6. Gunakan pipetter dan ujung pipet steril 1 mililiter (mL) untuk memindahkan 1 mL kultur bakteri ke dalam tabung 1.
Aduk rata dan pindahkan 1 mL dari tabung 1 ke tabung 2 menggunakan pipetter dan ujung 1 mL steril.
Ulangi Langkah 2 untuk tabung yang tersisa, setiap kali mentransfer 1 mL dari tabung yang paling baru digunakan ke tabung berikutnya.
Gunakan pipetter dan 0,1 mL tips steril untuk mentransfer 0,1 mL dari tabung 1 ke piring agar-agar. Nyalakan batang kaca berbentuk L dan gunakan untuk menyebarkan tetesan secara merata di sekitar piring. Inkubasi piring selama 48 jam pada suhu yang sesuai untuk bakteri yang digunakan. Berbagai jenis bakteri memiliki suhu pertumbuhan optimal yang berbeda. Jika Anda tidak dapat menemukan suhu pertumbuhan optimal menggunakan bahan referensi, coba inkubasi pelat pada 25 dan 37 derajat.
Ulangi Langkah 4, setiap kali mentransfer cairan dari tabung reaksi yang berbeda ke piring yang sesuai.
Perhitungan Populasi
Amati enam lempeng dan pilih satu dengan 30 hingga 200 koloni yang terisolasi.
Lipat gandakan jumlah koloni di piring dengan 10 untuk menghitung jumlah sel per mL biakan dari tabung pengenceran yang digunakan.
Lipat gandakan angka dari Langkah 2 dengan 10 ^ (angka pelat) untuk menghitung jumlah sel per mL kultur asli. Nilai 10 ^ (nomor pelat) adalah faktor pengenceran kultur yang digunakan untuk menginokulasi lempeng itu.